分享invitrogen膠原蛋白酶抗體操作步驟
瀏覽次數(shù)：1371發(fā)布日期：2023-02-18
invitrogen膠原蛋白酶常見的有兩種,一為Novo蛋白酶,另一為Carsberg蛋白酶,兩者的性質(zhì)和構(gòu)造相近,分別含275和274個(gè)氨基酸殘基,由一條多肽鏈構(gòu)成。在pH6～10下穩(wěn)定,低于6或大于11時(shí)很快失活。它不但能水解肽鍵,還具有水解酰胺鍵、酯鍵以及轉(zhuǎn)酯和轉(zhuǎn)肽的功能。由于酶的專一性，它只能對蛋白質(zhì)水解，不能作用于淀粉、脂肪等物質(zhì)。
invitrogen膠原蛋白酶的主要來源為微生物提取，研究和應(yīng)用較多的主要是芽孢桿菌，以枯草桿菌為最，也有少量其他菌種，比如鏈霉菌。天然菌種的生物試劑能力和所含的酶活性、穩(wěn)定性往往達(dá)不到工業(yè)生物試劑的需求，需要對菌種進(jìn)行篩選改進(jìn)，常用的方法有誘變、基因工程、蛋白質(zhì)工程、孢子熱處理等。主要目標(biāo)是提高酶的活性、穩(wěn)定性(耐溫耐堿)、抗氧化、抗螯合性能。
日常生活中常見的例子是洗衣粉中的藍(lán)粒子，包裝上一般會(huì)附有其使用方法，需要注意，invitrogen膠原蛋白酶只有在合適的pH區(qū)間內(nèi)才有活性，在酸性條件下沒有活性。
invitrogen膠原蛋白酶抗體操作步驟如下：
1)將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2)加受檢標(biāo)本，保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3)加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4)加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗(yàn)中，此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標(biāo)用的抗體分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應(yīng)用單抗體，一般選擇兩個(gè)針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng)，作一步檢測。
